固相萃取儀的操作方法

固相萃取儀是液固萃取柱和液相色譜技術結合發展而來的樣品預處理技術，可用于樣品的分離、純化和濃縮，廣泛應用于醫藥、食品、環保等領域。
 

　　1.選擇小柱或濾膜
 

　　小柱或濾膜的大小與規格應視樣品中待測物的濃度大小而定。對于濃度較低的體內樣品, 一般應選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。
 

　　2.活化
 

　　萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml 溶劑沖洗濾膜使填料保持濕潤, 因為填料干燥會降低樣品保留值，而各小柱的干燥程度不一,也會影響回收率的重現性。
 

　　3.上樣
 

　　一般可采取以下四種方法：
 

　　(1) 用0.1mol/L 酸或堿調節, 使pH<3或pH>9, 離心取上層液萃取；
 

　　(2)用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質后取上清液, 以水或緩沖液稀釋后萃取；
 

　　(3)用酸或無機鹽沉淀蛋白質后取上清液, 調節pH 值后萃取；
 

　　(4)超聲15min后加入水、緩沖液, 取上清液萃取。流速應控制為1ml/min, 流速快不利于待測物與固定相結合。
 

　　4.淋洗
 

　　反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液, 可在清洗液中加入少量有機溶劑、無機鹽或調節pH值。加入小柱的清洗液應不超過一個小柱的容積, 而SPE濾膜為5～10ml。
 

　　5.洗脫
 

　　應選用5～10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度, 則可先將洗脫液揮干后, 再用流動相重組殘留物后進樣。體內樣品洗脫后多含有水, 可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用極性較強的HPLC 分析柱分析洗脫物。